RSS订阅液态生物芯片
贡献者：不爱吃窝瓜 浏览：1139次 创建时间：2015-10-29
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1 概念
2 技术原理
概念
目前，这种基于荧光编码微球的高通量分析技术可提供快速、敏感、对一个样品进行至多可达1 0 0 个分析指标的检测。分析荧光微球的速度最高可达50 0 ( ) 个/ 秒。应用时，把对应不同检侧物的乳胶颗粒混合后再加人微量样品在悬液中与微球进行特异性结合。结合的结果可以在瞬间经激光判定后由电脑数据信息的形式记录下来。因为分子杂交是在悬浮溶液中进行，检测速度快，所以又有“液态生物芯片”之称。
技术原理
液态生物芯片技术是一种以徽球为基础的多指标数据采集和分析平台，起源于流式细胞仪。多指标检测是指在一个简单的试管中对一份样本同时进行多种指标的分析。在1 9 7 7年流式细胞仪首次以微球作为基础用于免疫分析。由于流式细胞仪有区分不同大小和颜色微球的能力，使得这种方法可以用于不同类别微球群的分析。应用不同大小微球同时进行不同指标分析的概念最初是由H o m n 等提出的〔’ : 。通过流式细胞仪用两种不同大小的微球可以同时检测两种不同的抗体，随后发展成用四种不同大小的微球检测四种不同特性的抗免疫缺陷病毒( H I V ) 抗体[ } 1 o L a 大小进行区分的微球允 许同时对多种指标进行分析， 但是小微球的聚集物与大微球不能很好的区分开来， 限制了这种以大小区分微球的应用范围。相比之下， 用可以产生两种不同波长染料对相同大小的微球进行染色， 以区分不同微球的方法得到广泛采用。这也就是现在商业化徽球采用的区分方法，如L u m i n e x公司研制的徽球是用两种不同颜色的荧光染料( 红色和橙色) 在不同比例下混合后分别将直径为5 . 6 y . m的聚苯乙烯微球染成为上百种颜色的点阵。根据微球所携带的独特的橙色/ 红色荧光配比，通过流式细胞仪时可予以区分。徽球表面有活性校基可供化学偶连用。蛋白可以通过氨基与徽球进行偶连，氨基标记的寡核酸探针可以通过化学反应共价结合到微球表面，包被有亲和素的微球可以用于结合生物素标记的分子。微球是分子反应的载体，为每个微球偶联1 一 2 x 1 护靶分子提供了充分的表面积。此外，这种大小可使微球充分悬浮，对于测定方法的建立和分析都很方便，并且也提供了液相反应的动力学效果。
检测和分析设备包括两部分，流式细胞仪和数字信号处理器，可对多种微球分析进行实时检测这一系统主要包括三部分: 流式细胞仪、微球和计算机硬件以及软件。流式细胞仪通过荧光强度来区分微球，同时区分三种荧光颜色: 绿色( 5 3 0 n m) , 橙色( 5 8 5 . m) 和红色( > 6 5 0 n .) o微球的大小由一种9 0度的光学散射装置来确定 用于区分分析中微球的聚集。橙色和红色荧光用于微球的分类， 绿色荧光用于分析的定量。
在多指标检测方法中，荧光标记的抗体、抗原或者核酸探针为每种反应提供了特定的信号。由于每种荧光反应特异性的结合到靶分子上，这种靶分子与一种微球偶联，所以可溶性的反应物无需不同的标记。所有的分子均使用可以激发绿色荧光的染料进行标记，例如B o d i p y 11 ( M ol e c u l a r P r b e s ) 或者异硫佩酸荧光( F IT C ) 。任何激发绿色荧光的染料均可以用作报告分子。
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