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血细胞分析仪

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  血细胞分析仪
  血细胞分析仪又叫血液细胞分析仪、血球仪、血球计数仪等,是医院临床检验应用非常广泛的仪器之一,随着近几年计算机技术的日新月异的发展,血细胞分析的技术也从三分群转向五分群,从二维空间进而转向三维空间,而且我们也注意到现代血细胞分析仪的五分类技术许多采用了和当今非常先进的流式细胞仪相同的技术,如散射光检测技术、鞘流技术、激光技术等等。本文重点就五分群血细胞分析仪器的检测方法及其应用加以阐述。
  目录
  ? 发展历史
  ? 基本原理
  1检测方法
  ? 体积、电导、激光散射法(VCS)
  ? 电阻抗、射频与细胞化学联合检测技术
  ? 激光散射和细胞化学染色技术
  ? 多角度偏振光激光散射技术
  2分类结构
  ? 分类
  ? 基本结构
  ? 机械系统
  ? 电学系统
  ? 血细胞检测系统
  ? 血红蛋白测定系统
  ? 计算机和键盘控制系统
  3选购验收
  ? 选购
  ? 验收
  4检验参数
  5仪器优点
  6存储记忆
  7常见故障
  8注意事项
  发展历史
  20世纪初期,莫尔德兰采用光电器进行血细胞计数;1947年拉格克兰茨采用高效光电倍增管加上光电扫描技术及暗视野照明法进行学习吧检测分析,克服了莫尔德兰光电法中存在的问题,可试用于临床;1958年,库尔特在前人的基础上,采用电阻率变化与电子技术相结合的方法,研制出性能比较稳定、操作比较方便的血液分析仪,称为库尔特电子血球计数器。20世纪60年代,以库尔特原理为基础的各种类型血液分析仪应运而生并广泛应用,逐步替代了传统的显微镜常规操作。70年代,在库尔特原理上开发出了以激光鞘流技术为基础的各类血液分析仪。80年代初推出了双通道仪器,除可直接计数血小板外,还能得到淋巴细胞总数和百分数等14个参数。90年代以来,有的学者根据幼稚细胞和成熟细胞膜的结构差异进行细胞分类,特别是对幼稚细胞的检测,为血细胞计数仪开创了新的领域。
  基本原理
  根据血细胞信号的获取方式不同,其原理可以归纳为5种:光电式、电容式、电阻式、离心式和激光散射式。
  1检测方法
  体积、电导、激光散射法(VCS)
  这是Beckman-Coulter公司生产的血细胞分析仪所采用的经典分析方法,它集三种物理学检测技术于一体,在细胞处于自然原始的状态下对其进行多参数分析。该方法也称为体积、电导、激光散射血细胞分析法。此技术采用在标本中首先加入红细胞溶血剂溶解掉红细胞,然后加入稳定剂来中和红细胞溶解剂的作用,使白细胞表面、胞浆和细胞体积保持稳定不变。然后应用鞘流技术将细胞推进到流动细胞计数池(Flowcell)中,接受仪器VCS三种技术的检测。
  V代表体积(Volume)测量法,是采用经典的库尔特专利技术,用低频电流准确分析细胞体积。体积是区分白细胞亚群的一个重要的参数,它可有效区分体积大小差异显著的淋巴细胞和单核细胞。
  C代表高频电导性(Conductivity),采用高频电磁探针原理测量细胞内部结构间的差异,也是该公司的专利技术。细胞膜对高频电流具有传导性,当电流通过细胞时,细胞核的化学组份可使电流的传导性产生变化,其变化量可以反映出细胞内含物的信息。该参数可用来区分体积相近而内部性质不同的细胞群体,如淋巴细胞和嗜碱性粒细胞,由于它们的细胞核特性不同而在传导性参数上有所区别。
  S代表激光散射(Scatter)测量技术,采用氦氖激光源发出的单色激光扫描每个细胞,收集细胞在10°~70°角度内出现的散射光 (MALS)信号。该激光束可穿透细胞,探测细胞内核分叶状况和胞浆中的颗粒情况,提供有关细胞颗粒性的信息,可以区分出颗粒特性不同的细胞群体。例如细胞内颗粒粗的要比颗粒细的散射光更强,因此可以用于区分粒细胞中的嗜中性、嗜酸性和嗜碱性三种细胞。
  电阻抗、射频与细胞化学联合检测技术
  典型机型如SysmexSE-9000/SE-9500/XE-2100等。这类仪器共有四个不同的检测系统,将标本用特殊细胞染色技术处理后再应用RF和DC技术对白细胞进行分类和计数。其共采用如下四个检测系统:
  嗜酸性粒细胞检测系统:该系统是利用电阻抗方式计数。血液经分血器分血后部分与嗜酸性粒细胞计数溶血剂混合,特异的溶血剂使嗜酸性粒细胞以外的所有细胞均溶解或萎缩,这种含完整嗜酸性粒细胞的液体经阻抗电路计数。
  嗜碱性粒细胞系统:该系统检测原理与嗜酸性粒细胞相同,不同的是其溶血剂只能保留血液中的嗜碱性粒细胞。
  淋巴、单核、粒细胞(中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)检测系统:该系统采用电阻抗与射频联合检测方式,使用作用较温和的溶血剂,对核及细胞型态影响不大。在内外电极上存在直流和高频两个发射器。由于直流电不能达到细胞质及核质,而射频电能透入胞内测量核大小和颗粒多少,因此这两种不同的脉冲信号的个数及高低综合反映了细胞数量、大小(DC)和核及颗粒密度(RF)。由于淋巴细胞、单核细胞及粒细胞的大小、细胞质含量、核形态与密度均有较大差异,故可通过扫描得出其比例。
  幼稚细胞检测系统:该系统也是利用电阻抗方式计数。其原理是由于幼稚细胞上的脂质较成熟细胞少,在细胞悬液中加入硫化氨基酸后,由于脂质占位不同,结合在幼稚细胞上的硫化氨基酸较成熟细胞多,且对溶血剂有抵抗作用,故能保持幼稚细胞的形态完整而溶解成熟细胞,即可通过阻抗法检测。
  激光散射和细胞化学染色技术
  在白细胞分类上,仪器采用两个通道进行,一个为过氧化酶检测通道,另一个为嗜碱细胞检测通道。
  过氧化酶反应(peroxidase,POX)是血涂片染色的一个常用细胞化学染色方法,用于鉴别原始细胞与成熟的粒细胞,鉴别粒细胞与非粒细胞。染色后的细胞内无蓝黑色颗粒出现为阴性反应,出现细小颗粒或稀疏样分布的黑色颗粒为弱阳性反应,出现黑色粗大而密集的颗粒为强阳性反应。过氧化物酶主要存在于粒细胞系和单核细胞系中,各类白细胞对过氧化物酶的反应是这样的:早期的原始粒细胞为阴性,早幼粒以后的各阶段都含有过氧化物酶,并随着细胞的成熟过氧化酶含量逐渐增强,中性分叶核粒细胞会出现强阳性反应,嗜酸性粒细胞具有最强的过氧化物酶反应,嗜碱粒细胞不含此酶呈阴性反应。在单核细胞系统,除早期原始阶段外,幼稚单核和单核细胞会出现较弱的过氧化物酶反应。淋巴细胞、幼稚红细胞、巨核细胞等都为过氧化物酶阴性反应。过氧化酶检测通道就是根据这个原理设计的,它检测每一个通过流动计数池中的白细胞,经过激光照射所产生的过氧化酶散射光吸收率,来当然试剂和辅助试剂均进行了改良。
  1)过氧化酶最强阳性的嗜酸性粒细胞;
  2)过氧化酶强阳性的嗜中性分叶核粒细胞;
  3)体积较大、过氧化酶弱阳性的单核细胞;
  4)体积较小、过氧化物酶阴性的淋巴细胞;
  5)体积大于淋巴细胞且过氧化物酶阴性的未染色大细胞,此类细胞增加提示幼稚或原始的各类细胞可能出现。
  在嗜碱细胞通道中采用的检测原理是:专用的嗜碱细胞试剂将除了嗜碱细胞以外的白细胞除去细胞膜,使其裸核化并体积变小,仅将嗜碱性粒细胞保持原有状态,体积明显大于其他类的白细胞。
  多角度偏振光激光散射技术
  美国雅培公司(ABBOTT)推出的血细胞分析仪,在白细胞分类中采用独特的多角度偏振光散射(MAPSS)技术,其所生产的血细胞计数仪从CELL-DYN 3000,3200,3500,3700,4000,以及Sapphire(蓝宝石),在白细胞分类上均采用了MAPSS技术。该技术基本原理是细胞在激光束的照射下,在多个角度都产生散射光,仪器在四个角度的四个检测器将接收到的相应的散射光信号,然后经过微处理器分析处理,将各类细胞安置在散点图上的相应位置,并计算出白细胞分类结果。
  多角度偏振光散射白细胞分类技术(Multi—Angle Polatised Scatter Separation of white cell,MAPSS)其原理是一定体积的全血标本用鞘流液按适当比例稀释。其白细胞内部结构近似于自然状态,因嗜碱性粒细胞颗粒具有吸湿的特性,所以嗜碱性粒细胞的结构有轻微改变。红细胞内部的渗透压高于鞘液渗透压而发生改变,红细胞内的血红蛋白从细胞内游离出来,而鞘液内的水分进入红细胞中,细胞膜的结构仍然完整,但此时的红细胞折光指数与鞘液的相同,故红细胞不干扰白细胞检测。在鞘流系统的作用下,样本被集中为一个直径30μm的小股液流,该液流将稀释的血细胞单个排列,然后通过激光束,激光照射于细胞上,在各个方向都有其散射光出现。
  1) 0°为前向角散射光,可粗略地测定细胞大小;
  2) 10°为狭角散射光,可测细胞结构及其复杂性的相对特征;
  3) 90°垂直光散射,主要对细胞内部颗粒和细胞成分进行测量。
  4) 90°为消偏振光散射,基于颗粒可以将垂直角度的偏振激光消偏振的特性,将嗜酸细胞从中性粒细胞和其它细胞中分离出来。
  5) 这四个角度同时对单个白细胞进行测量和分析后,即可将白细胞划分为嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞5种。ABBOTT的五分类法定量很有意思,不用传统的体积定量,而是采用数量定量,每次计数时完成10000个细胞测定即停止。
  2分类结构
  分类
  ⒈按自动化程度分:半自动血细胞分析仪、全自动血细胞分析仪和血细胞分析工作站、血细胞分析流水线;
  ⒉按检测原理分:电容型、电阻抗型、激光型、光电型、联合检测型、干式离心分层型和无创型;
  ⒊按仪器分类白细胞的水平分:二分群、三分群、五分群、五分群+网织红血细胞分析仪。
  基本结构
  各类型血细胞分析仪结构各不同。但大都由机械系统、电学系统、血细胞检测系统、血红蛋白测定系统、计算机和键盘控制系统等,以不同的形式组成。
  机械系统
  各类型的血细胞分析仪虽结构各有差异,但均有机械装置(如全自动进样针、分血器、稀释器、混匀器、定量装置等)和真空泵,以完成样品的吸取、稀释、传送、混匀,以及将样品移入各种参数的检测区。此外,机械系统还发挥清洗管道和排除废液的功能。
  电学系统
  电路中主电源、电压元器件、控温装置、自动真空泵电子控制系统以及仪器的自动监控、故障报警和排除等。
  血细胞检测系统
  国内常用的血细胞分析仪,使用的检测技术可分为电阻抗检测和光散射检测两大类。
  ⑴电阻抗检测技术:由信号发生器、放大器、甄别器、阈值调节器、检测计数系统和自动补偿装置组成。这类主要用在二分类或三分类仪器中。
  ⑵光散射检测技术:主要由激光光源、检测区域装置和检测器组成。
  ⑶激光源:多采用氩离子激光器,以提供单色光。
  ⑷监测区域装置:主要由鞘流形式的装置构成,以保证细胞混悬液在检测液流中形成单个排列的细胞流。
  ⑸检测器:散射光检测器系光电二极管,用以收集激光照射细胞后产生的散射光信号;荧光检测器系光电倍增管,用以接受激光照射荧光染色后细胞产生的荧光信号。
  这类检测技术主要应用于“五分类、五分类+网织红”的仪器中。
  血红蛋白测定系统
  由光源(一般为540nm波长)、透镜、滤光片、流动比色池和光电传感器组成。
  计算机和键盘控制系统
  使检测过程更加快捷、方便。
  3选购验收
  选购
  ⒈实用性
  医院应该根据自身的能力和标本量来决定购买何种档次的机器,不要盲目攀比,争相购买高档机器,从而造成仪器购置的浪费。
  ⒉仪器性能
  这是最关键的一个因素。在参照厂家宣传的基础上,要多听取专家意见和到友邻单位了解。
  ⒊价格比
  衡量同档次血液细胞分析仪的价格。
  ⒋售后服务。俗话说:救人如救火。对机器也是一样,机器损坏待修时间过长会造成病人对医院的信誉度下降,久而久之就会造成病人的流失。所以,机器的售后服务也是一个必须考虑的因素。
  ⒌辅助设备、试剂、消耗品和零配件价格。要建立请专家进行论证的制度,纠正过去由院长一人说了算的错误做法。
  验收
  ⒈验收前准备工作:仔细阅读说明书;按说明书要求准备仪器的工作环境和相关的外部设备;成立验收小组;拟定验收计划。
  ⒉开箱:必要时请商检局派人参加;开箱后按照装箱单清点物品是否和装箱单一致。
  ⒊安装:应该对安装过程进行详细的记录。
  ⒋验收仪器的技术性能指标:
  ⑴测定仪器试剂的本底;
  ⑵检测仪器的精密度:用高、中、低值新鲜血标本各测10次,计算X-S、 CV值,取20~30个标本随机排列,各测3次,求出总重复性CV%,它代表批内精度、仪器稳定性、互染等因素的总和;
  ⑶互染率:取高、低两个浓度全血(高、低值相差4~5倍),先测定高浓度3次,接着测低浓度3次,再测高浓度3次,计算高对低、低对高的互染率;
  ⑷线性:取全血标本,用盐水稀释相当于全血的90%、80%、70%,测得RBC、WBC、HGB结果做y=a+bx,a接近于0,b接近于1;
  ⑸校准:应由厂家提供全血校准物(低档血液细胞分析仪用校准颗粒及HGB校准液)进行校准;
  ⑹上述指标必须符合该仪器的出厂指标,才算验收合格。由验收小组成员、安装工程师及设备科同志签字后存档。
  4检验参数
  当今时代越来越多血细胞分析仪在增加,市场需求量越来越大,这就增大了参数方面的需求量。这些知识大家应该相对的有些了解,下面做一下详细介绍。
  新的参数以满足临床在诊断和鉴别诊断方面的需求。最初的血细胞计数仪仅仅能够计数红细胞和白细胞,后来又有了血红蛋白、血小板、红细胞压积、平均红细胞体积等几个参数。
  而发展成为血细胞分析仪后,又增加了许多分析和计算参数。最早加入到并得到公认的参数是红细胞体积分布宽度(RDW),目前该参数已经成为许多型号血细胞分析仪的标准参数,在各种贫血的诊断和治疗中起着重要作用,而该参数是很难应用人工方法测定的。
  目前有的仪器甚至可以提供40~50种测量或计算参数。但很多的新参数目前仍不能应用于临床,仅限定在实验室中供研究使用。在美国凡进入临床应用的新的实验参数,需要经过FDA(美国食品和药品管理局)的批准认可,其批准原则是经过多年实验认证,该参数应该是对临床诊断有用的、安全的和高效率的。这个认证是非常严格的,而在我国目前还缺乏这样严格的认证和批准体系。
  5仪器优点
  全自动智能机,方便,操作简单,全过程自动完成,无需人工进行试剂添加等工作。这是一款适合门诊、乡镇医院等的中小型医疗门诊,您是想找一款适合自己的全自动血细胞分析仪吗?那就来我们厂家咨询吧!
  下面我介绍一下这款全自动血液细胞分析仪:
  开关机对取样器微孔和管路进行自动清洗,使检测不受任何污染,使检测准确稳定。而且是智能双通道,双通道检测,既省时有准确,原来的单通道已经被淘汰了,单通道需要一项一项检测,不但检测速度慢,而且多次检测容易交叉污染,检测结果不稳定。
  另外装有高压灼热智能排堵系统,从而使全自动血细胞分析仪顺畅使用。高压反冲洗系统,都是保障仪器顺畅使得用的保护系统。
  再一个仪器内置热敏打印机,不需要连接电脑,便可完成检测及报告单打印。还可以自由选择报告单模式。全液晶触摸屏操作,方便快捷。如果想连接电脑也是可以操作的。
  6存储记忆
  血细胞分析仪功能非常齐全,让用户使用起来很是方便。像是前期有用户来过本医院,血细胞分析仪本身有记忆功能,您可以马上了解到病人前期来检查的时候是什么情况,可以很快的给病人检查指导现在将进行哪一项的检测项目。
  血细胞分析仪自身有存储记忆功能,可以存储>1000个样本数据,还可插入存储盘进行扩展存储。这样可存储更多病人的详细信息,方便给病人就诊以及病人的医治过程同时可以进行了解一下,采取下一阶段的医治方案。
  血细胞分析仪档案备份以后还方便病人了解自己的病情,即使用户后期更换血细胞分析仪,数据都是可以中文输入输出的,方便用户的整个使用过程。
  7常见故障
  血细胞分析仪也可以被称为血球计数仪,这种仪器一般都用在医院里。是医院临床上应用非常广泛的仪器,那么血球计数仪在使用过程中有什么故障呢?
  1、计数时本底错误。清洗时设定自动检测空白值,如果检测空白超出规定值,则会报警,就可以知道是出现了本底错误。要先检查稀释液或溶血剂是否有气泡、是否被污染,如果有则更换试剂。此外,要检查是否受到电磁波干扰,还要确保接地良好。此外,检测室检出器细孔如果污染,也会导致该故障,可启动保养清洗程序进行清洗。如果都不是以上原因,可查看旋转阀是否受到污染,并进行相应处理。
  2、RBC/WBC/PLT计数错误。可先检查是否因样品凝集引起,如果则更换样品。如果不是样品原因,可检查是是否受到噪音、电磁波的干扰,接地是否出现故障等。此外,RBC、WBC和HGB检出室下面的绝缘室排空异常也会引发该故障,应进行排除。检查检出室或检出器细孔是否被污染,检出器细孔是否被损坏,细胞计数定量隔膜泵和检出器之间的管道是否堵塞等。此外也要排除是电路板故障,对NO6363和NO2135进行检查。[2]
  8注意事项
  为了保证使用血细胞分析仪得出的结果能够尽量反映病人的真实情况,在使用时必须注意以下几方面:
  1.血样:由于静脉血受外界因素影响较小,成份比较稳定,检测结果准确度高重复性好,因此除婴儿外,建议取血者均应采用静脉血。如果采集未梢血时,注意不可局部过度挤压,避免血液中混入大量的组织液,而且易激活凝血系统产生局部凝血,导致检测结果的误差;第一滴血由于细胞成分不稳定应弃掉,用第二滴血进行检测。
  2.抗凝:使用拘橼酸盐抗凝剂时间过长易结晶,细胞形态易发生变化,影响计数结果的准确性;草酸盐易使血小板产生凝集,并可使白细胞形态发生变化,影响计数结果及分类;而肝素抗凝过量易引起白细胞凝集和血小板减少;EDTA-2Na较EDTA-2K的可溶性低,血小板凝集的可能性大。因此国际血液学标准委员会(ICSH)1993年发表的文件中建议使用EDTA-2K作为血细胞分析仪的抗凝剂,用量为1.5~2.2mg/ml血。
  3.采血后用塞子密闭,室温保存不超过6小时。
  4.稀释:稀释器、吸样管要经过校准。吸血后吸样管外的血液要完全擦干净。血液稀释后要尽快测定,否则易引起“稀释性溶血”。
  5.混匀:检测前混匀很重要,如果无旋转式混匀器应颠倒混匀至少8次。
  6.试剂:血细胞分析仪对试剂的要求非常严格,要求有严格的渗透压标准、稳定的导电率、高标准的纯净度以及对仪器管道和阀路无腐蚀作用。因此溶血剂、稀释液及清洗剂等最好选用原厂配套产品。
  7.白细胞分类:首先必须明确,迄今为止,世界上无论多先进的血细胞分析仪,进行的白细胞分类都只是一种过筛手段,并不能完全取代人工镜检分类。要坚决纠正有些单位用了血细胞分析仪就丢掉镜检的错误思想。
  8.质量控制:血液分析必须建立严格的质量控制制度,才能保证结果的可靠性。


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angelazhang    


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